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植物组织培养试验要点小结

文章作者:zhuobo 发布时间:2020-02-24 14:53:58 浏览次数:0

  乐昌每年种植香芋1334万m2,马蹄933.8万m2,是农民种植的主要经济作物之一,香芋和马蹄都是通过留种无性繁殖,种性退化问题较为突出,抗病性和抗逆性减退,利用组织培养的方法解决品种退化问题,在许多园艺作物上都得到了成功应用,因此乐昌市农业科学研究所从今年3月开始研究植物组织培养技术,为日后组培香芋、马蹄苗做准备。现就本所组培试验要点小结如下。

植物组织培养

  1、外围准备

  碟子和所有器械清洗完毕后将水擦干,用报纸捆包好,再放灭菌锅内灭菌。需灭菌的器械有:镊子、剪刀、解剖刀,碟子(8个包一包),玻璃杯2个和纱布(纱布用手撕成小块,不能用剪刀剪,否则用于擦试工作台等容易留下剪刀口布屑)。

  培养基可不经过煮制,将所有物质称量好,琼脂粉等需要溶解的物质溶解,之后混合定容调pH值,再倒入灌装机分装,分装时需不停的搅拌培养基,灌装时勿将培养基滴洒在瓶口,否则需用抹布擦干净或换玻璃瓶。

  灭菌锅在消毒前先预热,将夹层压力上升,减少煮制时间,煮完后手动慢慢放气(使湿热蒸汽趁热散去而不打湿防潮物)让压力下降,10min左右让室内压力降至0(避免闷锅时间长导致培养基不凝固),后取出后趁热迅速拧紧瓶盖,待冷却后移至缓冲室平放,使培养基平铺在瓶底凝固。

  外植体取材:取当年生萌动状态的饱满嫩枝芽作为外植体,先用5%洗衣粉浸泡5min,用刷子轻轻刷,用流水冲洗,时间视材料清洁程度而定,蒸馏水冲洗3~5次,可去除较多泥尘和微生物,最理想的清洗物质是表面活性物质~吐温,之后将外植体切割成适当大小,灭菌容器能放入为宜,移至酒精擦试好的带盖无菌瓶子内,放入无菌操作台备用。

  2、内围接瓶

  将所有需要摆上无菌操作台的东西用酒精擦试表面后摆好,需用酒精擦试的物品(包括:工作台面,台周围玻璃和母瓶,新培养基瓶,酒精灯,搁置架,打火机等),母瓶和新培养基放左上方,酒精灯放左下方,身体正前方放碟子,右上方靠左放器械搁置架,右上方靠右放接种器械灭菌器,左下方放打火机和半瓶70%酒精,后开紫外灯20min,再通风20min后开始操作。

  工作人员进入无菌接种室前,应先将手表、手镯、戒子等放室外,将手和手腕用肥皂清洗干净后,用酒精纱布擦拭双手、双腕,之后换工作服,包括更换拖鞋,穿白大褂,接种人员还要扎好头发,戴好帽子和口罩,指甲需剪短,将手和手臂用酒精擦试后戴手套操作,在组培室内不得高声喧哗、打闹,接种时不得随意谈话、说笑,以免造成污染,台外人员走动要轻,动作要小。

  打开无菌操作台玻璃门之前先用酒精雾喷,使悬浮在无菌操作台周围的灰尘颗粒沉降,操作时将搁置架在酒精火焰上方灼烧一下,打开包装好的碟子(注意手一定不能接触碟子边沿),镊子、解剖刀从报纸取出后,先用酒精擦试一下,再放在酒精灯火焰上灼烤1遍(工具的每1点在火焰上灼烤时间不得少于5s),之后开始接(转)苗。外植体的消毒用酒精和次氯酸钠(钙),最优消毒为:既有污染的,也有消毒好没被污染的,也有褐化的。

  取苗:瓶子在打开之前瓶口都需在火焰上灼烧7~10s,正式取苗时,瓶口不要斜向外或直立向上,以免空气中微生物落入瓶中。转苗时一次取苗不可太多,以免风干。切苗:碟子放在离风窗10~20cm处,镊子和手术刀不可太热,在操作过程中,手要在碟子斜上方操作,不可在其正上方操作,更不能交叉过碟子上方操作,切苗过程中产生的垃圾堆放在碟子一侧。注意操作操作人员的头、胳膊等不得进入台内。接苗:将未接瓶的培养基瓶口在酒精灯火焰上灼烤7~10s,烤完瓶口后再接苗,接苗时,镊子不要与瓶口接触,一瓶内一般接5~6棵苗,动作迅速,组培苗在瓶内排放均匀整齐,美观。

  封口、记录,接好后用酒精火焰灼烧瓶口封口,后迅速盖好瓶盖扭紧。碟子1瓶母瓶用1个,用完之后用镊子挑起拿开,接好的瓶苗随手放到无菌操作台外面推车上,工作过程中所产生的垃圾及时清理,防止交叉污染。下台前把品种代号、培养基类型、个人编号以及接种日期标示到瓶上。接好后将工作台擦试干净,把接种过程中产生的垃圾清理掉,台上的物品摆放整齐,用消毒粉兑水拖接种室和培养室地面,后开紫外灯照射。工作人员进出组培室随手关门。培养室需密闭,避免虫子进入,室温控制在25℃左右,保证植物培养最适温度。

  3、灭菌

  一经发现就随即灭菌处理,大量的进行高压锅灭菌,少量的加入工业酒精在室外进行处理。室内空气灭菌:每四周用高猛酸钾和甲醛(或臭氧)对室内空气灭菌1次。室内地面:每接种1次用消毒粉兑水拖一遍地面。

植物组织培养

  通过组织培养试验技术的研究,为日后本所香芋、马蹄的组织培养提供参考数据和技术支持,为乐昌农民提供高质量香芋、马蹄种苗,使农民获得更大的经济效益。

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